Блог Павла Старикова » Будни микробиолога, или как приготовить питательную среду

Приготовление питательных сред – это неотъемлемый элемент работы микробиолога, которому, бесспорно, необходим навык математического расчёта компонентов среды, ибо без этого никуда. Разобраться в этом (надеюсь, раз и навсегда) вам поможет статья, представленная ниже.

Источник: By Bill Branson, commons.wikimedia.org/w/index.php?curid=3346760

Предположим, нам нужно приготовить питательную среду YPDS agar. Давайте начнём с того, что разберёмся, из каких компонентов её готовить. Каждая буква аббревиатуры YPDS указывает на присутствие в готовой среде определённого компонента.
1) Y – дрожжевой экстракт (англ. yeast – дрожжи)
2) P – пептон
3) D – декстроза (в нашем случае, глюкоза)
4) S – сорбитол

Итак, с составными частями, кажется, разобрались! Теперь взглянем на рецепт среды:
1) Y – 1%
2) P – 2%
3) D – 2%
4) S – 1M

Поскольку Y, P, D – это сухие вещества, то их процент покажет нам, сколько граммов каждого из этих компонентов уйдёт на приготовление 100 мл питательной среды.
1 г на 100 мл – это и есть 1%.
Ещё раз взглянем на рецепт и увидим, что такова концентрация дрожжевого экстракта, а процент пептона и глюкозы в 2 раза больше.
Т.о. для приготовления 100мл среды мы берём следующие навески:
1) Y – 1г
2) P – 2г
3) D – 2г

Но глюкозу необходимо добавить не в виде сухой навески, а в форме раствора. Ниже я объясню, в чём тут дело. Для этого готовим 20%-ный раствор глюкозы, где 20г моносахарида приходится
на 100 мл раствора. Поскольку нам нужно 2г сухой глюкозы на 100 мл готовой среды, то рассуждаем так: в каком объёме
20%-ного раствора будет содержаться 2г моносахарида? Ответ: в 10мл. Не верите? Тогда составьте пропорцию!
Что ж, осталось разобраться с 1М сорбитола, а это не что иное, как 1 моль сорбитола, растворённый в литре готовой среды. Для удобства сведём объём среды к 100 мл, тогда нам нужно взвесить 0,1 моль сухого сорбитола. Но есть одна проблемка: весы (по крайней мере, у нас в лабе) выдают массу только в граммах и сопряженных единицах.
Тогда приходится вычислять, какова масса 0,1 моль сорбитола. Вспомним следующую формулу (я пояснял её значение в одном из своих видео).

Молярная массу сорбитола (182,18 г/моль), его концентрация (1М) и объём готовой среды (0,1 л) нам известны, дальше – простая арифметика!

Т.о. нам нужно 18,2 г сорбитола. Заметим, что объём среды для расчёта взят в литрах!!! Если по невнимательности вместо «0,1» подставить в уравнение «100», то вы бы насчитали не 18 г,
а 18 кг сорбитола. И вряд ли растворение такой навески в 100 мл пройдёт успешно.

Подведём итог: на 100 мл среды нам потребуется:
1) 1г дрожжевого экстракта
2) 2г пептона
3) 10 мл 20%-ного раствора глюкозы
4) 18,2 г сорбитола
Эти компоненты формируют жидкую питательную среду. Чтобы приготовить плотную среду для розлива в чашки, нам также нужно добавить агар (2г на 100 мл среды – 2%). Но всему своё время!

Вообще, 100 мл среды – это несерьезно. Давайте лучше рассчитаем количество компонентов на 1л YPDS, умножив всё на 10.
1) 10 г дрожжевого экстракта
2) 20 г пептона
3) 100 мл 20%-ного раствора глюкозы
4) 182 г сорбитола
Теперь рассмотрим порядок приготовления. Сначала взвешиваем всё сухое (Y, P, S), далее ссыпаем в стакан и добавляем бидистиллят (воду) в таком количестве, чтобы реально было всё это растворить (например, 500 мл). Но не так, чтобы объём смеси превышал 900 мл (почему, подумайте сами). Ставим всё это на магнитную мешалку, пока смесь не станет однородной.

Далее доводим водой объём смеси до 900 мл, перемешиваем и сливаем в банку. Если наша цель – получить плотную среду, то добавляем к 900 мл 20 г сухого агара (высыпаем в банку). Но не пугайтесь, если он выпадет в виде осадка: агар растворится при автоклавировании.
Параллельно готовим 100 мл 20%-ной глюкозы: добавляем в ёмкость 20 г сухой навески и доводим водой до метки 100 мл, перемешиваем.

Итак, у нас есть 900 мл среды без сахара и 100 мл раствора глюкозы. Эти объёмы необходимо автоклавировать (стерилизовать) раздельно, так как глюкоза в составе среды будет разрушаться при сильном нагревании. А её 20%-ный водный раствор сохраняет стабильность даже после стерилизации в автоклаве.
После стерилизации к 900 мл среды приливаем 100 мл раствора глюкозы так, чтобы избежать контаминации (сохранить стерильность), перемешиваем и получаем 1 л стерильной питательной среды, жидкой либо плотной, в зависимости от наличия в ней агара.

Спешу вас успокоить: микробиология – это не аналитическая химия, сверхточного соблюдения рецептуры нам не требуется. Но и на глаз всё делать также не советую. На этом всё! Остались неясности? Тогда задавайте вопросы в комментариях!

Кол-во просмотров: 631

• Первые протолюди были высокими и худыми, заявляют ученые
• Графен оказался источником бесконечной энергии: революция в энергетике
• Открытие Америки: кто сделал это первым на самом деле
• Атрибуты материи: понятие и свойства
• Версия для печати > Физики: поиски "тяжелой" темной материи в очередной раз не дали результатов
• Ученые: любые попытки охладить планету аэрозолями закончатся катастрофой
• Триггер Шмитта на транзисторах
• Версия для печати > Физики из России открыли новую необычную черту у искусственных атомов
• Графеновые суперконденсаторы для носимой электроники
• Роль экологической среды развития в ДОУ